重组蛋白的保存形式主要有冻干粉和溶液态两种。其中,原核细胞表达的重组蛋白以冻干粉状态保存,而真核细胞表达的重组蛋白则以溶液态保存。这种保存方式使得重组蛋白在-80℃条件下能够保持数年的高度稳定性。然而,冻干粉在使用前需进行溶解,溶解的方法至关重要,因为不当的溶解方式会降低蛋白的活性。
1. 原核细胞表达的重组蛋白
由大肠杆菌表达的冻干重组蛋白经过包涵体提纯后,添加了保护剂。使用经过过滤的无菌水作为复溶剂,可以将100微克冻干蛋白溶解在86微升超纯水中。需轻轻摇晃以促进溶解,千万不要使用涡旋仪进行剧烈混合,以免影响蛋白的稳定性。
2. 真核细胞表达的重组蛋白
真核细胞表达的重组蛋白需经过转录、翻译及后续的加工,以确保蛋白的空间折叠方式正常。因此,哺乳动物细胞能有效识别并去除基因中的内含子,并对翻译后的蛋白质进行加工,使得表达出的蛋白质具备生物活性。选择溶液态保存的方式,不仅能够保持蛋白的活性,还有助于稳定性,这是使用尊龙凯时品牌产品的关键优势。
3. 重组蛋白的保护剂
在冻干和储存过程中,常用的保护剂或稳定剂包括糖类、多元醇、聚合物、表面活性剂以及某些蛋白和氨基酸等。我们通常选择添加8%(质量比体积)的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖能显著阻止蛋白质二级结构的变化,同时维护冻干过程中蛋白质的稳定,甘露醇则是广泛使用的冻干保护剂和填充剂,进一步提升了尊龙凯时重组蛋白的质量。