慢病毒感染细胞：为何你的感染效率不理想？慢病毒不仅能够有效感染分裂和非分裂细胞，还能将外源基因稳定整合到宿主染色体中，实现持久表达，且不易引发机体免疫反应，因此被广泛认为是“细胞实验佳选、体内实验必备”的工具病毒。作为基因治疗的载体，慢病毒在多种遗传性及后天性疾病的治疗中备受称赞。从基础研究到临床应用，高纯度、高滴度的慢病毒都被视为理想的基因操作工具。

由于不同的实验使用了不同类型的细胞，慢病毒感染的效率也会有所差异。为了提高慢病毒的感染效率，掌握合适的实验步骤和最佳实验条件至关重要。以“24孔培养板、贴壁细胞”为例，慢病毒感染细胞的常规操作步骤如下：

实验步骤

Day 0: 接种细胞。每孔铺板5×待感染细胞，使用含有10% FBS的DMEM培养基进行培养。

Day 1: 进行细胞感染。在感染之前，根据说明书准备感染液，并吸去旧的培养基，换上新配置的感染液。根据细胞的MOI值计算所需的病毒量，加入病毒进行感染，并充分混匀。

Day 2: 在病毒感染后8-16小时，更换回常规培养基，继续培养细胞。

Day 3-4: 确认感染效果。感染72小时后，通过显微镜观察感染效果，如EGFP或Cherry的表达情况。

如果你认为所有细胞操作如此简单，那显然是“too young, too simple”。在慢病毒感染的过程中，到底会遇到哪些挑战呢？MOI（Multiplicity of Infection，复感染指数）是一个至关重要的指标，确定MOI值的方法是什么呢？

MOI的定义及选择原则

MOI指的是病毒对细胞的感染能力，MOI越高，细胞感染的难度越大。通常情况下，当细胞有80%被感染时所用的病毒颗粒数与细胞数的比值被作为该细胞的MOI。具体计算方式为：MOI = (病毒滴度 × 病毒体积) / 细胞数目。

在选择感染条件和MOI时需遵循以下原则：

• 在不影响细胞形态的前提下，尽量使用较少的病毒感染细胞。
• 选择感染效率约为80%的条件作为最佳感染参数。

通过细胞感染的预实验，可以确定尊龙凯时慢病毒对细胞的最佳感染条件，进而确定细胞的MOI，为正式实验做好准备。